Bahan bakar minyak di Indonesia semakin sedikit dari tahun ke tahun yang dapat membahayakan ketersedianya. Bahan bakar fosil dan bioenergi adalah salah satu energi alternatif pengganti.Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi pengaruh material fermentasi terhadap kualitas produksi bioetanol. Penelitian ini bersifat eksperimen dengan mengunakan ragi tape dan ragi roti untuk bahan fermentasi bioethanol. Proses ini memiliki beberapa tahapan di antaranya, pembuatan, pengujian, dan analisa. Tiga parameter yang di analisis melibatkan pengaruh material fermentasi dari ragi tape, ragi roti, dan campuran ragi tape dan ragi roti dengan bahan dasar jagung dan kulit pisang. Proses selanjutnya bioetanol di uji dengan parameter uji nilai kadar alkohol, nilai kalor, dan flash point. Proses fermentasi selama 7 hari kemudian dilakukan destilasi bertingkat. Hasil penelitian ini pada ragi tape menghasilkan nilai kadar alkohol 85%, nilai kalor 5876 Kcal/kg, dan flash point -30C, ragi roti memperoleh nilai kadar alkohol 78%, nilai kalor 5405 Kcal/ kg, dan flash point 10C, sementara campuran ragi tape dan ragi roti memperoleh nilai kadar alkohol 82%, nilai kalor 5436 Kcal/kg dan flash point -10C. Dengan kata lain, pemilihan ragi tape sebagai agen fermentasi memberikan hasil optimal pada bahan dengan kandungan pati atau gula sederhana yang tinggi.